Контроль качества микробиологических исследований: тесты, диски, реактивы и стандартизация

Достоверность микробиологических исследований зависит от качества биоматериала, питательных сред, тестов и реактивов, подготовки инокулюма, условий инкубации и соблюдения методики.

Для лабораторий и медицинских учреждений особенно важно контролировать эти этапы при идентификации микроорганизмов и определении их чувствительности к антимикробным препаратам. Ошибки могут привести к искажению результатов и необходимости повторного исследования.

Что контролируют при микробиологических исследованиях

Контроль должен охватывать весь лабораторный процесс, а не только итоговый результат. Основные этапы включают:

• прием и подготовку исследуемого материала;

• посев и культивирование микроорганизмов;

• качество и пригодность питательных сред;

• подготовку бактериальной суспензии;

• идентификацию выделенных культур;

• определение чувствительности к антимикробным препаратам;

• работу с контрольными штаммами;

• хранение тестов, дисков и реактивов;

• регистрацию и интерпретацию результатов.

Внутренний контроль качества позволяет лаборатории регулярно проверять стабильность применяемых методик и своевременно выявлять отклонения.

Тесты и реактивы для идентификации микроорганизмов

После получения культуры необходимо определить микроорганизм. Для этого применяют микробиологические тесты и диагностические системы, основанные на выявлении определенных биохимических свойств.

В зависимости от задачи оценивают ферментативную активность, образование индола, активность оксидазы и уреазы, использование углеводов и другие признаки.

Готовые тесты для идентификации микроорганизмов позволяют стандартизировать проведение ряда биохимических реакций. В ассортименте лабораторных поставщиков представлены как отдельные тесты, так и комплексные системы с несколькими субстратами. Например, такие решения могут использоваться для идентификации энтеробактерий, неферментирующих грамотрицательных бактерий, стрептококков, энтерококков и других групп микроорганизмов. Такие системы представлены и в разделе микробиологии Medbiolab.

При выборе микробиологических тестов учитывают:

• назначение диагностической системы;

• перечень определяемых характеристик;

• требования к исследуемой культуре;

• условия проведения реакции;

• способ учета результата;

• температурный режим хранения;

• срок годности.

Если для проведения теста требуются дополнительные микробиологические реактивы, они также должны соответствовать конкретной методике и инструкции производителя.

Питательные среды как элемент контроля качества

Результат микробиологического исследования напрямую связан с характеристиками используемой питательной среды. Необходимо контролировать срок годности, условия хранения, внешний вид и соответствие среды назначению.

Особенно важна стандартизация среды при определении чувствительности к антибиотикам. Состав, pH и другие характеристики способны влиять как на рост микроорганизма, так и на диффузию антимикробного вещества.

При работе по методике EUCAST для диско-диффузионного определения чувствительности используются стандартизированные среды на основе агара Мюллера—Хинтона; для требовательных микроорганизмов предусмотрены соответствующие модифицированные среды.

Поэтому замена предусмотренной методикой среды на внешне похожий вариант без подтвержденной применимости может повлиять на результат исследования.

Диски для определения чувствительности к антибиотикам

Для оценки чувствительности микроорганизмов широко применяется диско-диффузионный метод. На поверхность засеянной питательной среды помещают диски с заданным содержанием антимикробного препарата. В процессе инкубации вещество диффундирует в агар, и при подавлении роста вокруг диска образуется соответствующая зона.

Диаметр зоны измеряют и интерпретируют в соответствии с принятой стандартизированной системой.

Что влияет на точность диско-диффузионного метода

Даже качественные диски с антибиотиками не обеспечат корректный результат при нарушении других параметров исследования.

Подготовка инокулюма

Плотность бактериальной суспензии должна соответствовать используемой методике. Избыточная или недостаточная концентрация микроорганизмов способна изменить диаметр зоны подавления роста.

Для стандартизации суспензии могут использоваться денситометры и совместимые расходные материалы. Такие позиции также присутствуют в микробиологическом ассортименте Medbiolab.

Питательная среда

Необходимо использовать среду, предусмотренную выбранным методом. Отклонения ее характеристик могут влиять на рост культуры и распространение антимикробного препарата.

Состояние дисков

Диски с антибиотиками должны храниться в условиях, установленных производителем. Необходимо контролировать срок годности, целостность упаковки и соблюдение требований после ее вскрытия.

Инкубация

Температура, продолжительность и атмосфера инкубации определяются применяемой методикой и особенностями исследуемого микроорганизма.

Учет результата

Диаметр зон необходимо измерять и интерпретировать по правилам выбранной системы определения чувствительности.

Для чего нужны контрольные штаммы

Контрольные штаммы микроорганизмов с известными характеристиками позволяют проверить, работает ли аналитическая система в установленных пределах.

Их используют для контроля:

• питательных сред;

• дисков с антимикробными препаратами;

• отдельных реактивов и тест-систем;

• условий инкубации;

• процедуры определения чувствительности.

Если результат контрольного исследования выходит за допустимый диапазон, необходимо установить причину отклонения до продолжения работы с клиническими образцами.

Контроль особенно важен после изменения серии среды, дисков или других значимых компонентов методики, а также при выявлении нестабильных результатов.

Хранение и прослеживаемость расходных материалов

Универсальных условий хранения для всех микробиологических тестов и реактивов нет. Требования определяет производитель конкретного изделия.

В лаборатории необходимо контролировать:

• температуру и другие условия хранения;

• сроки годности;

• состояние упаковки;

• дату вскрытия, если она влияет на срок использования;

• номер серии продукции.

Прослеживаемость позволяет определить, какая серия питательной среды, тест-системы, реактива или дисков применялась при конкретном исследовании. Это упрощает поиск причины при обнаружении отклонений.

Как выбирать микробиологические тесты, диски и реактивы

При закупке лабораторных расходных материалов важно учитывать не только стоимость упаковки. Продукция должна соответствовать методике и задачам лаборатории.

Перед заказом стоит проверить:

1. Назначение. Для какого микроорганизма или этапа исследования предназначен тест, диск или реактив.

2. Соответствие методике. Возможность применения продукции в рамках действующей в лаборатории процедуры.

3. Условия хранения. Наличие оборудования для поддержания необходимого температурного режима и других условий.

4. Срок годности. Его необходимо сопоставлять с реальным расходом, чтобы избежать списания неиспользованных материалов.

5. Комплектность. Для некоторых диагностических систем требуются дополнительные реактивы или тесты.

6. Прослеживаемость. Должна сохраняться возможность идентифицировать серию продукции.

Для лаборатории с широким спектром исследований рациональнее заранее формировать перечень совместимых микробиологических тестов, питательных сред, дисков и реактивов, а не подбирать отдельные позиции после возникновения потребности.

Типичные причины ошибок

На практике точность исследования чаще всего снижают не отдельные материалы, а нарушение стандартизированной процедуры. К распространенным причинам относятся:

• неправильная подготовка инокулюма;

• использование неподходящей питательной среды;

• нарушение условий хранения дисков и реактивов;

• применение продукции после окончания срока годности;

• несоблюдение параметров инкубации;

• ошибки при постановке тестов;

• неправильное измерение зон подавления роста;

• использование неактуальных критериев интерпретации;

• отсутствие регулярного внутреннего контроля.

Если ошибка носит систематический характер, лаборатория может получать повторяемые, но некорректные результаты. Поэтому контроль должен охватывать весь процесс исследования.

Заключение

Контроль качества микробиологических исследований зависит от соблюдения методики, качества питательных сред, тестов, дисков и реактивов.

При выборе микробиологических расходных материалов для лабораторий и медицинских учреждений важно учитывать их назначение, условия хранения и соответствие используемой методике.